高速逆流色譜儀配液分液步驟
發布時間：2016-02-01 點擊次數：1846次
高速逆流色譜的操作
配液
選擇好一定比例的各種溶劑，量取特定體積，加入到干凈分液漏斗中，搖勻（搖勻過程中注意放氣），靜置10min左右。
如我們配制正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水（1：1：1：1,v/v）的液體約200mL，分別量取50mL正己烷，乙酸乙酯，甲醇，水加入分液漏斗搖勻，靜置即可。
分液
將分層好的上下兩相分別盛入兩個干凈的試劑瓶中。
脫氣
將分別盛有上下兩相的液體的試劑瓶放入超聲脫氣機中，脫氣20min。這一步主要是為了防止在高速逆流色譜儀工作的過程中產生氣泡。
平衡
首先開啟水浴保證溫度，然后將固定相以一定流速泵入色譜儀中，待到出液口有液體流出即可。使機器運轉，再以一定流速泵入流動相。當出液口有流動相流出時，即達到平衡。
進樣
停泵，將六通閥旋轉到load端，用注射器（哈哈，不是進樣器，普通注射器即可）將六通閥內空氣吹盡，抽取樣品（樣品用流動相或固定相溶解），樣品充滿整個進樣圈即可。然后將六通閥旋轉到inject端，開泵，同時檢測器開始記錄。
收集
按要求收集餾分即可。
后處理
一般采用旋轉蒸發儀蒸干即可。
逆流色譜的應用
逆流色譜的應用主要有天然植物有效成分分離，海洋生物活性成分的分離，抗生素分離，蛋白質分離等等。
